Esta área protegida posee varios bienes materiales del Patrimonio Cultural. Su identificación es compleja por la gran cobertura vegetal característica de la selva. La mayoría del registro arqueológico se corresponde con sitios de ocupación humana que actualmente se encuentran en estudio. Las investigaciones registraron hallazgos aislados donde se han identificado concentraciones superficiales de materiales líticos y fragmentos cerámicos. Hace unos 1.000 años estas tierras estaban habitadas por grupos que basaban su economía en la caza, la pesca y la recolección.

Entre fines del siglo XV y principios del XVI los guaraníes ocuparon esta región. Este pueblo se caracterizó por ser muy buen navegante, practicaban la agricultura comunitaria además de la caza, la pesca y la recolección. En esta región se establecieron las misiones jesuíticas, entre siglo XVII y hasta la expulsión de la orden en 1767.

En 1882 la Armada Argentina comienza las primeras exploraciones en busca de nuevas áreas para explotar sus recursos naturales. Durante la primera década del siglo XX se emprendieron actividades extractivas de madera y productivas de yerba mate. Asimismo, la extraordinaria belleza de los saltos del río Iguazú comenzó a generar interés turístico, y en 1922 se construye el Viejo Hotel Cataratas.

En el año 1902 Carlos Thays es enviado por el gobierno para trazar los planos de las cataratas del Iguazú y proyectar obras para su visitación. En 1934 se crea al área protegida. En 1939 los arquitectos Estrada y Bustillo plantean el diseño urbano de Puerto Aguirre que años más tarde pasará a ser denominado Puerto Iguazú. En estos años se construyen varios de los edificios públicos de valor histórico y cultural de la localidad, entre ellos la Intendencia del Parque Nacional Iguazú.

Actualmente en los entornos del área protegida habitan varias comunidades del pueblo Mbyá Guaraní. Su historia y costumbres son transmitidas oralmente a cada nueva generación. Estas comunidades realizan diversas actividades para obtener sus ingresos y recursos para su subsistencia. Desde hace varias décadas venden productos elaborados con técnicas artesanales tradicionales como: cestería con fibras vegetales, tallas en madera, instrumentos musicales y collares. En el Parque Nacional funciona la Feria Yhary para la exhibición y venta de artesanías.